藥敏紙片法是最常用的一種試驗(yàn)方法，能直接體現(xiàn)出抗菌藥物的抗菌效用。其優(yōu)點(diǎn)是直觀明顯、對(duì)比鮮明，有一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。打孔法僅用1個(gè)打孔器，省去了數(shù)量較多的紙片和藥物的浪費(fèi)。由于液體的表面張力作用，孔中液體在較低斜度下不會(huì)外流，能獲得理想的圓形抑菌圈。
1 材料與方法
（1）材料。藥物為青霉素、鏈霉素和硫酸慶大霉素，購(gòu)自華北制藥股份有限公司。菌種為大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌和產(chǎn)氣桿菌，由安徽科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。培養(yǎng)基和試劑為普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、蒸餾水、磷酸二氫鉀和生理鹽水。儀器為恒溫水浴培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)和高壓蒸汽滅菌器。
（2）方法。藥物配制參照《抗生素藥品檢驗(yàn)》的配制方法。培養(yǎng)基制備。在容量為1000mL的三角燒瓶中加入蒸餾水1000mL，放在電爐上加熱。用天平準(zhǔn)確稱(chēng)取35.0g營(yíng)養(yǎng)瓊脂，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解，然后放入高壓滅菌鍋中經(jīng)（121℃，20分鐘）高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過(guò)高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5mm，冷卻凝固后備用。菌種活化。將4種菌種分別接種至普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面后，置37℃下培養(yǎng)箱中過(guò)夜備用。
濾紙片的制備及處理。將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為5.0mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，塞上棉塞，放入高壓滅菌鍋中經(jīng)(121℃，20分鐘)高壓滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。取一定數(shù)量紙片，分別放入100單位/mL 的各種藥物中，浸潤(rùn)后備用。接種培養(yǎng)。分別取上述菌株的新鮮培養(yǎng)物，在無(wú)菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過(guò)不同菌種的瓊脂培養(yǎng)基上，再用無(wú)菌鑷子，將在藥液中浸潤(rùn)的紙片均勻間隔貼于各培養(yǎng)基表面，再用無(wú)菌吸管在接種過(guò)不同菌種的培養(yǎng)基上打孔，將藥液用移液槍移入孔內(nèi)，各藥液對(duì)每種試驗(yàn)菌均做3個(gè)重復(fù)。貼入時(shí)標(biāo)記起始位置，按順時(shí)針或逆時(shí)針?lè)较驅(qū)V紙片順序貼入，輕壓紙片使接觸良好。放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，24小時(shí)后取出，觀察抑菌圈，測(cè)量并記錄結(jié)果，取抑菌圈直徑平均值。抑菌圈直徑測(cè)量參照《微生物和檢驗(yàn)技術(shù)》判定結(jié)果，用抑菌圈的直徑表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好。
2 結(jié)果與分析
（1）抑菌圈直徑測(cè)量。濃度為100單位/mL的藥物紙片貼于4種細(xì)菌培養(yǎng)物上和培養(yǎng)24小時(shí)后，用直尺測(cè)量抑菌圈的直徑，取平均值。再將濃度為100單位/mL的藥液用移液槍移入四種細(xì)菌培養(yǎng)物上，用直尺測(cè)量抑菌圈的直徑，取平均值。
3 結(jié)論
在同一藥液濃度的條件下，打孔法的抑菌效果優(yōu)于藥敏紙片法。
（謝秀麗 安徽省池州市貴池區(qū)畜牧獸醫(yī)局；蔣月美 安徽省池州市貴池區(qū)唐田鎮(zhèn)人民政府）
